Triagem in vitro de extratos de plantas do Cerrado ricos em polifenóis frente a Alphavirus

Abstract

O vírus Chikungunya (CHIKV) e o vírus Mayaro (MAYV) são arbovírus do gênero Alphavirus, reemergente, que causam distúrbios musculoesqueléticos debilitantes em humanos, caracterizados por febre, poliartralgia e mialgia. Não há vacina ou tratamento para pessoas infectadas com o CHIKV e o MAYV até o momento, destacando a importância de aprofundar o conhecimento sobre as interações das células hospedeiras do desses vírus e as estratégias de replicação viral. O bioma Cerrado é considerado um importante centro de biodiversidade abrigando espécies úteis para a medicina popular. Por esse motivo, o uso de compostos à base de plantas que afetam os ciclos de replicação desses vírus tem sido proposto como uma estratégia promissora. Um estudo preliminar foi realizado para avaliar o potencial anti-CHIKV e anti-MAYV in vitro de extratos metanólicos de raízes de Chiococca alba (L.) Hitchc, obtido por dois métodos de extração: maceração (CAH21) e soxhlet (CAH24). Os perfis de citotoxicidade dos extratos de C. alba foram obtidos através da viabilidade lisossomal usando o ensaio de incorporação do vermelho neutro, e a atividade antiviral foi determinada pelo ensaio de placa de lise, somente na etapa de pós-tratamento, ambos os ensaios realizados em células Vero. Os ensaios in vitro apresentaram que os extratos de C. alba têm atividade anti-CHIKV e anti-MAYV. Após, identificamos os metabólitos presentes nos extratos por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE-DAD) e por cromatografia gasosaespectrometria de massa (GC-MS) e, selecionamos a partir de estudo in silico os flavonoides naringina e vitexina para acessar a capacidade desses metabólitos de se ligarem aos sítios ativos das proteases virais (nsP2) de ambos os vírus. Diante dos resultados, descobrimos que C. alba é uma fonte de metabólitos antivirais. Além disso, avaliamos ainda o potencial de extratos aquosos, ricos em polifenóis, das folhas de Eugenia dysenterica DC (ED), Erythroxylum suberosum (ES), Miconia chamissois Naudin (MC), Morus nigra Linné (MN) e Sapindus saponaria L. (SS), em diferentes etapas do ciclo de replicação do CHIKV, por meio de análises in vitro e do estudo fitoquímico do extrato que apresentou maior atividade antiviral. Os perfis de citotoxicidade dos extratos, frações e das subfrações, foram obtidos através da viabilidade lisossomal usando o ensaio de incorporação do vermelho neutro, e a atividade antiviral foi determinada pelo ensaio de placa de lise em células Vero. Os compostos foram isolados por cromatografia de coluna (CC) de Sílica gel ou Sephadex e identificados por cromatografia de camada delgada (CCD), e ressonância magnética nuclear (RMN de 1H e 13C), demonstrando serem cumarinas glicosiladas. Os ensaios in vitro revelaram que os extratos ED e ES apresentaram moléculas com atividade anti-CHIKV, portanto a partir do fracionamento por ensaio bio-guiado, investigamos a atividade das frações, subfrações e moléculas presentes no extrato ES. As descobertas aqui descritas indicam que metabólitos secundários dos extratos CAH21, CAH24, ED e ES são uma fonte potencial de novos compostos antivirais e podem ser utilizados para o desenvolvimento de novos fármacos anti-CHIKV e/ou anti-MAYV.