Caracterização molecular, fenotípica e análises de biofilme em Staphylococcus aureus isolados do leite de mastite bovina

Abstract

O Staphylococcus aureus é um dos principais agentes responsáveis por ocasionar mastites em vacas leiteiras. Esse patógeno é responsável por prejuízos econômicos significativos devido à redução na qualidade e quantidade de leite produzido. Além dessas perdas, essas bactérias possuem potencial patogênico, são amplamente resistentes a antimicrobianos e capazes de produzir biofilme no úbere bovino e em equipamentos. Também, o uso indiscriminado e desnecessário de antibióticos no tratamento dessa enfermidade pode resultar em efeitos residuais no leite, ocasionando riscos à Saúde Pública. O presente trabalho teve como objetivo geral analisar o perfil molecular e fenotípico com relação a resistência a antimicrobianos, capacidade de produção de biofilme e presença de genes de bomba de efluxo em 35 isolados de S. aureus obtidos de amostras de leite cru de mastites clínicas e subclínicas no Distrito Federal e sua Região Integrada de Desenvolvimento. Para isso, as amostras foram confirmadas bioquimicamente e por biologia molecular pela presença dos genes específicos nuce aroA. Para a avaliação do perfil de resistência, foram avaliados 20 antimicrobianos pelo método de disco difusão em ágar (n=35) e testados os seguintes genes de resistência: mecA, blaZ, van(A), tet (M), tet(K). Para a investigação de produção de biofilme foram utilizados o ágar vermelho congo, ensaio de adesão em microplaca e PCR para os genes icaA, icaD e bap. Ainda, foram testados os genes mrs(A), tet(38), nor(A) e qacA para a avaliação de bombas de efluxo e resistência a desinfetantes. Como resultados obtidos, a análise do perfil de resistência antimicrobiana mostrou maior resistência (71,42%) às bases farmacológicas linezolida, seguida por penicilina G (60%) e tetraciclina (37,14%). Entre os isolados, 21/35 (60%) foram classificados como resistentes a múltiplas drogas. Os genes amplificados com maior frequência foram blaZ (88,5%), seguido por tet(K) (31,4%) enquanto o gene mecA não foi detectado. Observou-se que no ensaio com o ágar vermelho congo 21,42% foram capazes de produzir biofilme. Enquanto pelo método de adesão em placa, 100% dos isolados produziram biofilme sendo classificados em 3 categorias: 39,39% foram capazes de produzir biofilme fortemente, 30,30% moderadamente e 27,27% fracamente. O gene icaA esteve presente em 33.33%, o gene icaD em 90,90% enquanto o gene bap apenas em 9,09% das amostras avaliadas. Dentro dos genes relacionados ao efluxo os genes tet(38) e nor(A) foram os mais frequentemente amplificados com 80% e 62.8% respectivamente. A capacidade de formar biofilme e a resistência antimicrobiana observados em alguns isolados neste trabalho destacam a importância de estudar e monitorar as cepas locais in vitro.